要確保BMP6標準品分裝的準確性,可從?操作前準備、分裝過程控制、分裝后核對?三個環(huán)節(jié)把控,具體方法如下:
一、操作前準備:校準工具,提前規(guī)劃
?校準移液槍?:分裝前用校準過的移液槍分裝,確保移液體積誤差控制在±1%以內(nèi),避免大體積偏差影響濃度;
?提前計算分裝體積?:根據(jù)單次實驗需要的最高濃度母液量確定每管分裝體積,常規(guī)96孔實驗分裝?100-200μL/管?即可,不要隨意增減;
?預冷離心管?:分裝配制好的標準品提前放在冰盒上,離心管也提前預冷,避免溫度變化導致體積膨脹或蛋白降解。
二、分裝過程:規(guī)范操作控誤差
?混勻后再分裝?:復溶后的標準品輕輕顛倒混勻,室溫靜置5分鐘讓溶液均勻,不要剛加完稀釋液就立即分裝,避免濃度不均勻;
?貼壁加樣,避免氣泡?:移液時槍頭貼離心管管壁緩慢打出液體,避免產(chǎn)生氣泡導致體積不準,也避免蛋白因氣泡剪切力變性;
?每管核對體積?:分裝10管后抽查1-2管,用移液槍復核體積,偏差超過5%需要重新校準移液槍后再繼續(xù)分裝;
?快速分裝,及時凍存?:全程在冰盒上操作,控制分裝時間在30分鐘以內(nèi),分完立即放入-20℃凍存,避免標準品長時間放在室溫降解。
三、分裝后核對:做好標記,避免偏差
每管都清晰標注母液濃度和分裝日期,不要漏標,避免后續(xù)使用時濃度弄錯;
同一批次分裝完成后,可隨機選1管做預實驗驗證,確認標準曲線R2≥0.98、回收率合格,說明分裝濃度準確。
關鍵提醒
分裝誤差主要來自移液槍不準和體積規(guī)劃錯誤,只要提前校準移液槍、按單次用量分裝,就能保證濃度誤差控制在5%以內(nèi),實驗要求。


